鼠尾胶原蛋白I型，sigma分装
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Application
Muscle cells, hepatocytes, spinal ganglion, embryonic lung cells, Schwann cells. Mediates the attachment of many cell types.
Recommended for use as a cell culture substratum at 6-10 μg/cm2. This product may not be suitable for 3-D gel formation.
General description
Collagen is classified into a number of structurally and genetically distinct types. We use the nomenclature proposed by Bornstein and Traub. Do not confuse Sigma type designations with recognized collagen classification types.
Preparation Note
Prepared by a modification of the extraction method of Bornstein, M.B., Lab. Invest., 7, 134 (1958).
性质
| Related Categories | 2D Cell Culture, Adhesion, Attachment, and Matrix Factors, Adhesion, Attachment, and Matrix Factors for Stem Cell Expansion, Application Index,Attachment Factors, |
| product line | BioReagent |
| form | powder |
| surface coverage | 6‑10 μg/cm2 |
| solubility | 0.1 M acetic acid: soluble1 mg/mL (Allow to stir at room temperature 1-3 hours until dissolved.) |
| suitability | suitable for cell culture |
| storage temp. | 2-8°C |
| Gene Information | rat ... Col1a1(29393) |
使用方法
1、细胞培养器皿的表面包被 推荐浓度： 1-5ug/cm2
以包被浓度为 2 ug/cm2 为例：
用无菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/ml。按表 (一)体积加到相应的培养器皿中：
|
|
表面积(cm2 ,每孔或每皿) |
加入
0.012mg/ml 胶原的体积 ( ul ) |
|
96孔细胞培养板 |
0.3 |
50 |
|
24孔细胞培养板 |
1.9 |
300 |
|
12孔细胞培养板 |
3.8 |
600 |
|
6孔细胞培养板 |
9.5 |
1580 |
|
35mm细胞培养皿 |
8 |
1330 |
|
60mm细胞培养皿 |
21 |
3500 |
|
100mm细胞培养皿 |
55 |
9170 |
确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1小时后，用PBS洗3-4次后直接使用。
包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3个月以上的时间。
2、三维胶原的制备
sigma鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。 sigma胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06X 体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。
需要的溶液 ( 均需要 无菌 、 预冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚红用于 pH 指示 )或 10x 培养液 , 0.1mol/L NaOH,
0.1mol/L 乙酸(一般不用), 双蒸水
A．不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul sigma鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100ul 10xPBS或10x培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10xPBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。
B．含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200ul
sigma鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23ul 10xPBS或10x培养液，混匀(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。
注：鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。
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