细菌膜蛋白提取试剂盒

细菌膜蛋白提取试剂盒

产品组成：

规格                   50T    100T

细菌膜蛋白抽提液A      25ml   50ml

细菌膜蛋白抽提液B      500ul  1ml

膜蛋白溶解液           10ml   20ml

蛋白酶抑制剂混合物     100 ul 200 ul

注：

● 膜蛋白提取液： 含多种有效成分，可以充分释放膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

● 蛋白酶抑制剂混合物：包含6种独立的蛋白酶抑制剂，AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin

A、Bestatin、E-64。

注意：

1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。

2、如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

储存条件：

蛋白酶抑制剂-20℃保存；

蛋白提取液 2-8℃保存。

有效期：

一年。

注意事项：

● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管

底，避免开盖时试剂损失。

● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清

洗并彻底清除残留清洁剂。

● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品简介：

膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白

样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂

增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。

通善细菌膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学方法的高产膜蛋白提取试剂盒。细菌膜蛋白

提取试剂盒可以从各种菌体中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高

质量的蛋白提供了保证。该试剂盒提取的蛋白具有天然活性，可用于各种下游实验。

产品特点：

1、使用方便，从细菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。

2、将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。

3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包

含6 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。

该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白

酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

6、本品可用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

7、本品不含 EDTA，可以用于金属螯合层析等下游应用。

试剂盒以外自备试剂和仪器

● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管

● 涡旋振荡器 ● 冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：

􀁺 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

􀁺 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

􀁺 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

􀁺 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1、每500ul抽提液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。

2、将菌液在低温下10000×g离心5分钟，收集菌体，用PBS洗菌体2次。

3、按每20mg湿重菌体样本加入500ul抽提液A（大约菌体和提取液体积比1:2-1:3，完

全淹没菌体即可），混匀，冰上放置2-3小时，中间每隔30分钟振荡混匀30秒。

4、将菌液在低温下12000×g离心5分钟，取上清。

5、在上清中加入10ul抽提液B，充分混匀。

6、在37℃水浴10分钟。

7、在37℃ 1000×g离心5分钟。

8、小心吸取管底部大约50ul液体。

9、用溶解液稀释该溶液，即得细菌膜蛋白样品。该样品可以用Bradford或BCA方法进

行定量，调整相应的浓度用于下游实验。

使用本产品发表的部分新文献：

● Longwen Xiao, Liang Zhou et al. Apa is a trimeric autotransporter adhesin of

Actinobacillus pleuropneumoniae responsible for autoagglutination and host cell adherence Journal of Basic Microbiology 2011 （IF=1.395）